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內參即是內部參照（Internal control），是指在組織和細胞中表達相對穩定的一類(lèi)蛋白質(zhì)，通常由管家基因編碼。這些蛋白質(zhì)被用作檢測蛋白表達水平變化時(shí)的參照物，以確定實(shí)驗的準確性和可重復性。

在Western Blot實(shí)驗中，我們使用內參其實(shí)就是使用與內參對應的抗體來(lái)檢測內參的表達量。由于內參在不同組織和細胞中的表達量相對穩定，通過(guò)檢測每個(gè)樣品內參的表達量，我們可以校正上樣誤差，從而獲得更可靠的半定量結果。使用內參還可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完全，并檢查該實(shí)驗中的顯色或發(fā)光體系是否正常。通過(guò)選擇合適的內參，可以將這些樣本之間的差異消除或最小化，減少實(shí)驗誤差，提高結果的可靠性和可重復性。因此，選擇合適的內參是Western Blot實(shí)驗的關(guān)鍵步驟之一。

根據所做的蛋白樣本的種屬確定，哺乳動(dòng)物一般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等；植物樣本一般選擇Plant actin、Rubisco等；其他來(lái)源樣本應參考文獻報道選合適蛋白作為內參。

根據研究對象的不同，選擇不同的內參對于檢測細胞中不同位置的蛋白非常重要。一般情況下，選擇β-actin和GAPDH作為總蛋白的內參就可以滿(mǎn)足要求。然而，對于細胞質(zhì)、細胞核、細胞膜等不同位置的蛋白檢測，我們需要選擇相應的內參，以確保實(shí)驗結果具有科學(xué)性和可靠性。常用內參抗體分子量及其定位情況如下：

在選擇內參抗體時(shí)應考慮目的蛋白分子量大小，通常要求目的蛋白與內參蛋白分子量相差5kDa以上。例如，若檢測的目的蛋白分子量為45kDa，則不宜選擇分子量為42kDa的β-actin作為內參，應考慮選擇分子量為36kDa的GAPDH作為內參。

在實(shí)際的實(shí)驗環(huán)境中，處理條件可能會(huì )影響一些內參的表達，因此需要考慮研究的信號通路是否會(huì )對內參的表達產(chǎn)生影響。例如，在糖代謝的研究中，不能使用GAPDH作為內參，因為GAPDH是參與糖酵解過(guò)程中的酶，在某些細胞中，缺氧等條件會(huì )改變GAPDH的表達；在凋亡實(shí)驗時(shí)，Lamin等也不適合作為內參；在加入抗有絲分裂和抗真菌藥物時(shí)，Tubulin的表達易受影響，不適合作為內參等。因此，在設計實(shí)驗方案的時(shí)候應考慮這些因素并參考相關(guān)文獻，在實(shí)驗過(guò)程中，還需要留意內參表達是否出現異常等因素的考慮。