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實(shí)驗動(dòng)物采血
在實(shí)驗研究中,經(jīng)常會(huì )采集實(shí)驗動(dòng)物血液用于分析和評估動(dòng)物體內的生理和病理情況。根據不同的實(shí)驗設計和要求及動(dòng)物的特性和生理差異,選擇合適的采血方法,可以減少動(dòng)物傷害,提高實(shí)驗的成功率和結果的可靠性。今天小編給大家普及下實(shí)驗動(dòng)物采血方法及采血管的選擇。
01 大鼠、小鼠采血方法
采血方法:動(dòng)物麻醉后并固定,將鼠尾在45-50℃溫水中浸泡數分鐘,也可用二甲苯等化學(xué)藥物涂擦,使局新血管擴張。擦干尾部,用酒精棉球消毒鼠尾,用無(wú)菌手術(shù)刀,快速截斷小鼠尾尖約1-2mm,可以從尾部向尾尖方向按摩,以增加血流。用毛細采血管收集血液,或直接滴入收集管中。采血結束后,用干棉球按壓傷口或使用止血劑來(lái)止血。
應用:所需血量少的連續多次采次,此法每只鼠可采血10余次。常用于紅、白細胞計數、血紅蛋白測定、制作血涂片等。
采血量:小鼠可每次采血約0.1ml,大鼠約0.4ml。
優(yōu)點(diǎn):操作較簡(jiǎn)單,動(dòng)物不致死,可多次重復采血。
缺點(diǎn):取血量少,約0.1ml,采血速度慢,不適于樣本量大和需要較多血量的實(shí)驗;不適用于老齡鼠;按摩鼠尾時(shí)可能會(huì )增加溶血風(fēng)險,易污染。
頸靜脈采血
采血方法:左手固定大鼠,使大鼠呈現腹部朝上的一個(gè)“十”字形,讓大鼠頸部依靠在保定器上,頸部與前肢呈大于90°角,用頭部固定器扭動(dòng)頸部,使鎖骨出現一個(gè)三角窩,去除鎖骨附近被毛,酒精棉球擦拭消毒。右手持注射器,沿鎖骨處進(jìn)針(去除毛發(fā)后可清晰可見(jiàn)靜脈處),刺穿皮膚后輕回拉注射器,使注射器產(chǎn)生負壓。大約30度向上進(jìn)針,當注射器內有血液出現時(shí)說(shuō)明已經(jīng)刺入采血位置,保持注射器,回拉注射器完成采血。采血完成后用干棉球稍按壓止血即可。
應用:適用于人手少、動(dòng)物數量多、實(shí)驗時(shí)間緊以及藥代動(dòng)力學(xué)等需連續少量取血的研究中。
優(yōu)點(diǎn):相對于眼眶后靜脈叢采血法對動(dòng)物造成的疼痛感更小,更加符合動(dòng)物福利,所以現在大有取代眼眶后靜脈叢采血的趨勢。本法適用于大鼠。
缺點(diǎn):要求技術(shù)熟練,在一定時(shí)間內,如果采血量和采血次數增加,會(huì )使動(dòng)物引起一定的應激性反應或采血部位的傷害。
眼眶靜脈叢采血
采血方法:動(dòng)物麻醉后并放置動(dòng)物臺上,用左手拇指和食指壓迫小鼠頸部?jì)蓚韧瑫r(shí)將皮膚向后拉(注意避免用力過(guò)度壓迫氣管),使眼球外突,提示眼眶后靜脈叢充血。右手拿一毛細管(建議采用0.5*100mm規格的毛細管,在使用前折成小段,每段大約3-4cm),置于內側眼角處,并且以與鼻翼平面成30-45度沿內眥插入內眼角,滑入眼球后方,輕輕向眼底方向刺入。不能刺地過(guò)深,一般小鼠2-3mm,大鼠4-5mm即可。當感到阻力時(shí)即停止推進(jìn),轉180°使斜面對著(zhù)眼眶后界,即有血液流出。采血結束后,立即松開(kāi)手指對小鼠的壓迫,使眼球復位,同時(shí)拔出毛細管??捎酶擅耷驂鹤⊙劭?,確保止血。
應用:適用于需中等量血液、避免小鼠死亡的血液指標連續監測。
優(yōu)點(diǎn):眼眶后靜脈叢采血法簡(jiǎn)單,便于掌握,采血成功率高,小鼠死亡率低,血流較快。
采血量:小鼠可采血約0.2-0.3ml,大鼠約0.4-0.6ml。
缺點(diǎn):采血后需要至少10天的組織修復過(guò)程,否則采血量產(chǎn)生一定影響;不能采集到無(wú)菌的血樣,血液中可能混有眼窩內的組織液和腺體分泌物,對于血樣要求較高的研究,應謹慎使用;易損傷眼球,易感染,造成失明。
腹主動(dòng)脈采血法
采血方法:大鼠麻醉后仰臥固定在實(shí)驗臺上,將大鼠腹腔注射10%水合氯醛以0.03ml/kg麻醉5min即可。大鼠背部放置一粗試管以充分暴露腹主動(dòng)脈,常規消毒后用手術(shù)剪刀沿腹正中線(xiàn)剪開(kāi)腹腔。術(shù)后右手持穿刺針針尖斜面朝下入針角度約25°~30°朝向心端放向刺入,深度以5mm左右為宜,抽吸血液即可。
采血量:大鼠可采血約8~10ml,一般采3種血樣全過(guò)程只需2min。
優(yōu)點(diǎn):該采血法取血量大、不易溶血,血液質(zhì)量較好,適用于多項目檢測,且不損傷器官,有利于病理組織學(xué)檢查。
缺點(diǎn):操作比較復雜,應注意掌握適宜的麻醉深度,防止心跳驟停,同時(shí)防止大鼠躁動(dòng)。本方法造成的出血速度快,易造成出血性的心臟停跳,故要防止采血過(guò)程中出血。
02 豚鼠采血方法
先將豚鼠耳消毒,用刀片沿血管方向割破耳緣,切口約長(cháng)0.5cm,在切口邊緣涂上20%的檸檬酸鈉溶液,防治血凝,則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml。
固定豚鼠,將其右或左后肢膝關(guān)節伸直,腳背消毒,找出足靜脈,左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手將注射針刺入靜脈,拔針后立即出血。
用手指觸摸,選擇心跳最明顯的部位,把注射針刺入心臟,血液即流入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應細長(cháng)些,以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。
03 兔的采血方法
將兔固定,拔去耳緣靜脈局部的被毛、消毒,用手指輕彈兔耳,使靜脈擴張,用針頭刺耳緣靜脈末端,或用刀片沿血管方向割破一小切口,血液即流出。本法為兔最常用的采血方法,可多次重復使用。
在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈。用左手固定兔耳,右手持注射器,在中央動(dòng)脈的末端,沿著(zhù)與動(dòng)脈平行的向心方向刺入動(dòng)脈,即可見(jiàn)血液進(jìn)入針管。由于兔耳中央動(dòng)脈容易痙攣,故抽血前必須讓兔耳充分充血,采血時(shí)動(dòng)作要迅速。采血所用針頭不要太細,一般用6號針頭,針刺部位從中央動(dòng)脈末端開(kāi)始,不要在近耳根部采血。
采血量超過(guò)1ml時(shí),頸靜脈是常用的采集部位。方法同大鼠頸靜脈采血。
使家兔仰臥,穿刺部位在第三肋間胸骨左緣3mm處, 針頭刺入心臟后,持針手可感覺(jué)到兔心臟有節律的跳動(dòng)。此時(shí)如還抽不到血,可以前后進(jìn)退調節針頭的位置,注意切不可使針頭在胸腔內左右擺動(dòng),以防弄傷兔的心、肺。
04 狗的采血方法
后肢外側小隱靜脈位于后肢脛部下三分之一的外側淺表皮下,由前側方向后行走。采血時(shí),將動(dòng)物固定,局部剪毛、消毒,采血者左手緊握剪毛區上部或扎緊止血帶,使下部靜脈充血,右手用連有6號或7號針頭的注射器刺入靜脈,左手放松,已適當速度抽血即可。
前肢背側皮下頭靜脈位于前腳爪的上方背側的正前位。采血方法同上。
前兩種方法需技術(shù)熟練,且不適于連續采血。大量或連續采血時(shí),可采用頸靜脈采血,方法同小鼠、大鼠的頸靜脈采血方法。
本法為采取動(dòng)脈血最常用的方法。操作簡(jiǎn)便,稍加訓練的狗,在清醒狀態(tài)下將狗臥位固定于狗解剖臺上。伸展后肢向外伸直,暴露腹股溝三角動(dòng)脈搏動(dòng)的部位,剪毛、消毒,左手中指、食指探模股動(dòng)脈跳動(dòng)部位,并固定好血管,右手取連有5號半針頭的注射器,針頭由動(dòng)脈跳動(dòng)處直接刺入血管,若刺入動(dòng)脈一般可見(jiàn)鮮紅血液流入注射器,有時(shí)還需微微轉動(dòng)一下針頭或上下移動(dòng)一下針頭,方見(jiàn)鮮紅血液流入。有時(shí)可能刺入靜脈,必須重抽。抽血畢,迅速拔出針頭,用干藥棉壓迫止血2-3分鐘。
紅色頭蓋:普通血清管,采血管不含有任何添加劑,用于常規血清生化,血庫和血清學(xué)相關(guān)檢驗;
桔紅色頭蓋:快速血清管,采血管內有促凝劑,加速凝血過(guò)程。適用于急診血清的化驗系列;
金黃頭蓋:惰性分離膠促凝管,一般用于急診血清生化試驗;
綠色頭蓋:肝素抗凝管,一般用于紅細胞壓積實(shí)驗,紅細胞脆性試驗,血氣分析,血沉及普通的生化測定;
紫色頭蓋:又叫EDTA抗凝管,一般是用于普通的血液學(xué)檢測,但是不適用于凝血實(shí)驗及血小板功能的檢測,也不能用于鈉、鉀、鈣、鐵、堿性磷酸等的測定;
淺藍色的頭蓋:枸櫞酸鈉,凝血實(shí)驗管;
黑色頭蓋:枸櫞酸鈉血沉實(shí)驗管;
灰色頭蓋:草酸鉀、氟化鈉,氟化鈉管,適用于血糖測定,一般不用于尿素酶法測定尿素,常用于血糖檢測。
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