技術(shù)專欄
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ELK Biotechnology總結(jié)實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠常用的采血方法
常見小鼠采血方法 小鼠是科研實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但由于其體積小，血管細(xì)，采血難度大，進(jìn)而影響采血的質(zhì)量。 ELK簡(jiǎn)要總結(jié)了常見的小鼠采血方法，僅供參考： 一只成年小鼠的循環(huán)血量大約是1.5~2.5ml，大約體重的 6~8%。在對(duì)營(yíng)養(yǎng)狀況良好的小鼠進(jìn)行采血時(shí)，單次采血量最多可以到達(dá)循環(huán)血量的10%，（例：若20克小鼠，它的總血量約占1.2-1.4毫升，即每次取120ul-140ul血液不會(huì)對(duì)小鼠有太大的影響）。采血之后應(yīng)該給予溫?zé)岬牡葷B溶液補(bǔ)充，可以在2~3個(gè)星期內(nèi)恢復(fù)原有的水平。兩周采血量小于血液循環(huán)的10%，單周小于7.5%，小鼠血液循環(huán)7
2022-09-20
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ELK組織勻漿樣本的收集處理與保存（史上最全）
? 組織勻漿定義：將分化的細(xì)胞群用物理機(jī)械手段或其它方法，使細(xì)胞破碎，細(xì)胞內(nèi)容物釋放，與細(xì)胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體。 一、取適量組織塊，用預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.4）沖洗，去除表面殘留的血液與雜質(zhì)。（很多用戶疑惑，這個(gè)適量，到底是多少？ELISA試劑盒檢測(cè)中：血清或細(xì)胞上清樣本用量100μL/指標(biāo)（單孔）；組織用量15mg/指標(biāo)（單孔），差不多干枯綠豆大小。?）具體老鼠各器官大小可見下圖。 二、將組織塊稱重，再剪切成盡可能的小碎塊，以便充分勻漿； 三、可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：
2022-09-20
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ELISA實(shí)驗(yàn)中做好標(biāo)曲為什么這么重要
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡(jiǎn)單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問(wèn)題，是科研中比較常用的一種檢測(cè)方法。而這種簡(jiǎn)單的分析方法的核心，就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒有它，我們的實(shí)驗(yàn)就變成了一個(gè)二元的“是/不是”測(cè)試。有了它，我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么，是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強(qiáng)大呢?讓我們?cè)贓LISA的背景來(lái)討論這個(gè)問(wèn)題。 簡(jiǎn)單地說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽(yáng)性對(duì)照。例如，如果對(duì)人類IgG進(jìn)行ELISA檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類IgG，它會(huì)讓你立刻得出一系列的結(jié)論。 1.我的EL
2022-08-01
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NF-κB經(jīng)典信號(hào)通路
NF-kB(核因子激活的B細(xì)胞的k-輕槌增強(qiáng))在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵性的調(diào)控作用，它調(diào)控的基因編碼：急性期反應(yīng)蛋白、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子、免疫調(diào)節(jié)分子、病毒癌基因、生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)錄和生長(zhǎng)調(diào)控因子等。通過(guò)調(diào)控多種基因的表達(dá)，NF-kB參與免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多種生物進(jìn)程。 NF-kB家族有由cRel, RelA (p65) , RelB, NF-kB1 (p50)、NF-kB2 (p52)組成,它們?cè)贜端都具有Rel同源結(jié)構(gòu)域，其中cReI, ReIA (p65)和ReIB存在轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(TAD)，可正向調(diào)節(jié)基因表達(dá)；p52和p50分別由前體蛋白p100、
2022-07-21
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PCR、qPCR、RT-PCR、Real-time PCR區(qū)別淺析
PCR技術(shù)介紹： 聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）是在體外酶促擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，由美國(guó)Kary Mullis及其同事于1985年發(fā)明。熱穩(wěn)定性Taq DNA聚合酶的應(yīng)用和自動(dòng)化裝置的發(fā)明與完善，使PCR技術(shù)進(jìn)入實(shí)用階段。該技術(shù)的發(fā)明和廣泛應(yīng)用，大大推動(dòng)了分子生物學(xué)各相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，發(fā)明者也因此獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。 隨著PCR技術(shù)的成熟，派生了不少相關(guān)技術(shù)。這類技術(shù)具有敏感、特異、快速和簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用越來(lái)越廣，不少國(guó)家將其納入檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法；
2022-07-13
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PD-1人源化小鼠模型介紹
品系背景∶C57BL/6N 品系構(gòu)建策略∶ 在小鼠PD-1基因位點(diǎn)敲入人源PD-1胞外域序列，保留小鼠跨膜域和胞內(nèi)域，構(gòu)建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。 品系說(shuō)明∶ hPD-1在小鼠體內(nèi)具有正常的生理表達(dá)和調(diào)節(jié)模式。 PD-1胞外域人源化，利于hPD-1靶向藥物的識(shí)別。 保留小鼠PD-1胞內(nèi)域，保證正常的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 小鼠靶基因不表達(dá)，避免交叉反應(yīng)。 小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。 研究應(yīng)用∶ 本模型可用于評(píng)估hPD-1靶向藥物在免疫健全小鼠體內(nèi)的有效性及安全性∶ 與人源化腫瘤細(xì)胞系聯(lián)用 例如∶與MC38-hPD-L1腫瘤細(xì)胞
2022-05-23
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簡(jiǎn)述鐵死亡與慢性病鐵代謝調(diào)控機(jī)制
鐵是人體必需的微量元素，不僅參與血紅素合成，而且作為一些關(guān)鍵酶的輔基在多種生理代謝中發(fā)揮重要功能。鐵缺乏可引發(fā)缺鐵性貧血。人類遺傳性血色病是一類由基因突變引 起的鐵過(guò)載疾病，導(dǎo)致多個(gè)器官中鐵積累，皮膚色素沉積及多種器官的病變，如2型糖尿病、 肝纖維化等。超過(guò)85% 血色病患者攜帶遺傳性血色素沉著病蛋白（hemochromatosis protein，HFE）突變基因, 少數(shù)患者攜帶鐵調(diào)素(hepcidin，HAMP)、 鐵調(diào)素調(diào)節(jié)蛋白(hemojuvelin,HJV)、鐵外排蛋白(ferroportin 1,FPN)或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrinreceptor,TFR)2突變基因，近
2022-05-23
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炎癥因子白介素6
白介素-6 白細(xì)胞介素是非常重要的細(xì)胞因子家族，截至2022年，得到承認(rèn)的成員已達(dá)40個(gè)；它們?cè)诿庖呒?xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過(guò)程中均發(fā)揮重要作用，此外白細(xì)胞介素還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)。 白細(xì)胞介素6(interleukin6, IL-6)是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員，在急性炎癥反應(yīng)中處于中心地位。白介素6于1980年由Weissenbach發(fā)現(xiàn)，是一種多功能細(xì)胞因子，在人體代謝、自身免疫細(xì)胞分化、疾病治療等方面都有重要作用。 IL-6結(jié)構(gòu)特性 ? IL-6是小分子多肽，由四個(gè)α螺旋組成。分子量為19-28KD,具有184個(gè)氫基酸殘基，
2022-05-23
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